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共聚焦顯微鏡的原理

作者:上海豫光 來源:未知 日期: 2012-05-03 17:40:37
導(dǎo)讀:傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的實(shí)際上是場(chǎng)光源,由于光散射,在所觀察的視野內(nèi),樣品上的每一點(diǎn)都同時(shí)被照射并成像,入射光照射到整個(gè)細(xì)胞的一定厚度,位于焦平面外的反…
       傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡使用的實(shí)際上是場(chǎng)光源,由于光散射,在所觀察的視野內(nèi),樣品上的每一點(diǎn)都同時(shí)被照射并成像,入射光照射到整個(gè)細(xì)胞的一定厚度,位于焦平面外的反射光也可通過物鏡而成像,使圖像的信噪比降低,影響了圖像的清晰度和分辨率。此外,傳統(tǒng)的光學(xué)顯微鏡也只能對(duì)局部做平面成像。激光掃描共聚焦顯微鏡脫離了這種模式,采用激光束做光源,激光束經(jīng)照明針孔,經(jīng)由分光鏡反射至物鏡,并聚焦于樣品上,對(duì)標(biāo)本內(nèi)焦平面上每一點(diǎn)進(jìn)行掃描。然后,激發(fā)出的熒光經(jīng)原來入射光路直接反向回到分光鏡,通過探測(cè)針孔時(shí)先聚焦,聚焦后的光被光電倍增管探測(cè)收集,并將信號(hào)輸送到計(jì)算機(jī),在彩色顯示器上顯示圖像。在這個(gè)光路中,只有在焦平面上的光才能穿過探測(cè)針孔,焦平面以外區(qū)域射來的光線在探測(cè)小孔平面是離焦的,不能通過小孔。因此,非觀察點(diǎn)的背景呈黑色,反差增加,成像清晰。
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