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共聚焦顯微鏡的標本制備及圖像采集

作者:上海豫光 來源:未知 日期: 2012-05-16 15:57:59
導讀:許多用于共聚焦顯微鏡的實驗技術(shù)方法,多以普通光學顯微鏡為基礎,必要時進行改進以適合共聚焦顯微鏡的需要。對于普通顯微鏡,主要方法是降低焦點以外的熒光干擾…
            許多用于共聚焦顯微鏡的實驗技術(shù)方法,多以普通光學顯微鏡為基礎,必要時進行改進以適合共聚焦顯微鏡的需要。對于普通顯微鏡,主要方法是降低焦點以外的熒光干擾。與普通光學顯微鏡相比,共聚焦顯微鏡可進行厚標本深部的熒光觀察,對標本的染色要求染色的時間較長或熒光探針的濃度較高,這對于普通光學顯微鏡可能造成染色過度,而無法分辨其細節(jié)。
       激光能穿越較厚的標本這一問題解決后,可用普通切片機切出較厚的切片,可也用振動切片機制備活體腦組織切片,在激光掃描共聚焦顯微鏡下,可獲得良好的標記效果。為了觀察標本深部也可將標本從切片取下,使其顛倒后再貼到切片上進行觀察,從兩個方向觀察標本。也可用長波長激發(fā)的熒光染料,來標記標本較深部位的物質(zhì),而不用短波長激發(fā)的熒光染料標記,與短波長熒光染料標記的圖像相比,其分辨率略有降低,但卻獲得了較強的穿透力,多光子激光掃描共聚焦顯微鏡,因為采用了紅光作為激發(fā)光,則有利于從標本的深部采集圖像。
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