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共聚焦顯微鏡的自發(fā)熒光

作者:上海豫光 來源:未知 日期: 2012-05-17 11:05:06
導讀:當組織進行圖像采集時,自發(fā)熒光可能是背底增加的一個主要原因。自然情況下,多種細胞可產生自發(fā)熒光。在酵母菌細胞和植物細胞,可看到紅色的綠葉素熒光。另外,…
            當組織進行圖像采集時,自發(fā)熒光可能是背底增加的一個主要原因。自然情況下,多種細胞可產生自發(fā)熒光。在酵母菌細胞和植物細胞,可看到紅色的綠葉素熒光。另外,某些試劑,尤其是戊二醛固定劑可能是自發(fā)熒光的來源,但經氫硼化物處理后,其自發(fā)熒光可降低或消除。使用超出自發(fā)熒光激發(fā)光波長范圍的激發(fā)光可消除自發(fā)熒光,為避免短波長自發(fā)熒光的干擾,常選用Cy5的長波長進行激發(fā)。通過使用不同波長的激光激發(fā)未染色的標本,可評估標本自發(fā)熒光的量,注意設定光電倍增管的增益和背底水平以及激光的功率。自發(fā)熒光可通過高強度激光快閃作用進行光漂白,將標本完全暴露于水銀燈的光照中也有同樣的效果。更復雜的處理自發(fā)熒光的方法是進行時間分辨熒光成像。自發(fā)熒光也可通過圖像提取技術加以減除,盡管自發(fā)熒光在進行圖像采集時常常會帶來問題,但在進行多標記顯示時,也可利用組織的自發(fā)熒光來顯示完整的細胞形態(tài)。
 
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